Odrzucanie aloprzeszczepu szpiku kostnego przez limfocyty T Rozpoznawanie różnicy pojedynczych aminokwasów w HLA-B44 czesc 4

Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej uzyskane od pacjenta wykazywały specyficzną aktywność cytotoksyczną wobec komórek docelowych wyrażających podtyp B44.1 IEF, ale nie poddawały lizy komórek docelowych B44.2 dodatnich (Fig. 2). Panel z komórkami docelowymi obejmował wyznakowane 51Cr komórki monojądrzaste krwi obwodowej transformowane fitohemaglutyniną od dawcy szpiku (HLA-B44.1), jak również komórki docelowe od biorcy (HLA-B44.2). Figura 3. Figura 3. Jednowymiarowa analiza IEF transfekowanych HLA-B44.1 (SKB44), nientransfekowanych komórek CIR (CIR) i komórek homozygotycznych pod względem HLA-B44.1 (PITOUT) i HLA-B44.2 (EK) . Komórki wytrącono monoklonalnymi przeciwciałami 4E (anty-HLA-B i C) w ścieżkach A i W6 / 32 (klasa anty-HLA I) w ścieżkach B.
Gen kodujący HLA-B44.1 wyizolowano z biblioteki genomowego DNA zbudowanej z B-limfoblastoidalnej linii komórkowej PITOUT, która jest homozygotyczna pod względem HLA-B44.1. Klon SKPB1 zawierał gen HLA-B, ponieważ hybrydyzował on do sondy 158,5, która jest specyficzna dla 5 HLA-B, 24 i sondowała pHLA1.1, która jest specyficzna dla 3 HLA-B25 (dane nie przedstawione). Ten gen transfekowano do linii komórkowej B-limfoblastoidów CIR, która nie wykazuje ekspresji antygenów HLA-A lub HLA-B. Swoistość cząsteczki HLA-B ekspresjonowanej na transfekowanych komórkach analizowano za pomocą IEF. Jak można zobaczyć na Fig. 3, komórki transfekowane HLA-B (SKPB1) wykazywały ekspresję pasma IEF odpowiadającego antygenowi HLA-B44.1.
Tabela 1. Tabela 1. Porównanie reszt aminokwasowych w pozycji 156 w allelach HLA-B44.1 i B44.2 IEF z różnych źródeł. Sekwencję nukleotydową i pochodne sekwencje aminokwasowe HLA-B44.1 otrzymano z klonu SKPB1 i porównano z sekwencjami dwóch wcześniej opublikowanych sekwencji, HLA-B * 440131 i HLA-B * 4402,32, z których oba kodują HLA- B44.2 Cząsteczki IEF. Antygen HLA-B44.1 i antygen HLA-B44.2 odpowiadający allelowi HLA-B * 4402 różnią się tylko jednym aminokwasem kodowanym przez kodon 156 domeny .2 (tabela 1). Ta różnica aminokwasów wynika ze zmiany pozycji nukleotydowych 195 do 197: CTG (leucyna) w B44.1 i GAC (kwas asparaginowy) w B * 4402. Było jedno dodatkowe, ale ciche podstawienie nukleotydem w pozycji 146 (G w B44.1 i C w B * 4402). Pisanie oligonukleotydem wykazało, że gen HLA-B44.2 pacjenta również miał kwas asparaginowy w kodonie 156, podczas gdy gen donora HLA-B44.1 miał leucynę w tej pozycji (Tabela 1).
Inny allel kodujący HLA-B44.2 – HLA-B * 4401 – również koduje kwas asparaginowy w kodonie 156 (Tabela 1). Jednakże allel HLA-B * 4401 ma trzy dodatkowe substytucje nukleotydowe w eksonie 2 i dwie substytucje w eksonie 4. Żadne z tych podstawień nie znaleziono w czterech limfocytach B-limfoblastoidalnych ekspresjonujących wariant HLA-B44.1 IEF lub w czterech takich linie komórkowe wyrażające wariant IEF HLA-B44.2 (przez typowanie oligonukleotydowe, dane nie pokazane). Podobnie, geny HLA-B44 odpowiedniego pacjenta i dawcy nie miały żadnego z tych podstawień i różniły się od siebie tylko w kodonie 156 (Tabela 1). Odmienność w pozycji 156 była zatem jedyną różnicą aminokwasową w antygenie HLA-B44 między dawcą szpiku kostnego (HLA-B44.1) a pacjentem (HLA-B44.2, HLA-B * 4402); B * 4401 prawdopodobnie reprezentuje bardzo rzadki wariant HLA-B44.2.
Aby zbadać, czy cytotoksyczne limfocyty T otrzymane od pacjenta podczas odrzucania przeszczepu szpiku były skierowane specyficznie przeciwko leucynie w pozycji 156 w cząsteczce HLA-B44.1, te jednojądrzaste komórki krwi obwodowej były stosowane jako komórki efektorowe w uwalnianiu 51Cr. analiza
[patrz też: spychalscy środa wlkp, sabamed, dziś jestem blondynką ]